掃描電子顯微鏡(SEM)如何工作?
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電子和電磁透鏡的光源來自放置在柱頂?shù)逆u絲燈,與透射電子顯微鏡的鎢絲燈相似。
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在將熱能施加到電子源后,電子會(huì)發(fā)射出來,并以快速運(yùn)動(dòng)的方式移動(dòng)到陽極,陽極帶有正電荷。
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電子束從樣品表面激活高能級(jí)的初級(jí)散射(主)電子和低能級(jí)的次級(jí)電子的發(fā)射。電子束與樣品相互作用產(chǎn)生信號(hào),該信號(hào)給出有關(guān)樣品表面形貌和成分的信息。
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樣品無需特殊處理即可在SEM下進(jìn)行可視化,甚至可以直接檢查風(fēng)干樣品。但是,微生物標(biāo)本需要固定,脫水和干燥,以在暴露于高真空顯微鏡下時(shí)保持細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征并防止細(xì)胞崩潰。
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樣品被安裝并涂有薄層重金屬元素,以允許電荷在樣品表面上的空間散射,從而可以更好地產(chǎn)生具有較高清晰度的圖像。
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通過在顯微鏡的薄部分上來回傾斜電子束來實(shí)現(xiàn)此顯微鏡的掃描。當(dāng)電子到達(dá)標(biāo)本時(shí),表面會(huì)釋放出微小的電子aw,稱為二次電子,然后被特殊的檢測(cè)器捕獲。
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當(dāng)二次電子到達(dá)并進(jìn)入探測(cè)器時(shí),它們撞擊閃爍體(一種被帶電粒子或高能光子撞擊時(shí)發(fā)出熒光的發(fā)光材料)。這會(huì)發(fā)出閃光,然后通過光電倍增管將其轉(zhuǎn)換為電流,從而向陰極射線管發(fā)送信號(hào)。這將產(chǎn)生看起來像可以觀看和拍攝的電視圖像的圖像。
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進(jìn)入檢測(cè)器的二次電子的數(shù)量由樣品的性質(zhì)高度定義,即凸起的表面接收大量的電子,進(jìn)入檢測(cè)器,而凹陷的表面到達(dá)表面的電子更少,因此進(jìn)入檢測(cè)器的電子更少。
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因此,凸起的表面在屏幕上看起來更亮,而凹陷的表面在屏幕上看起來更暗。
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