組織學(xué)是一個術(shù)語，指的是組織和細胞的微觀解剖學(xué)研究。正確的光學(xué)顯微鏡組織學(xué)樣品制備對于從組織樣品中獲得高質(zhì)量結(jié)果至關(guān)重要。

幾乎所有組織學(xué)程序共有3個主要步驟。shou先，固定樣品，以保護組織并減緩組織降解。接下來，將樣品浸入具有與其自身相似的機械性能的材料或包埋介質(zhì)中。包埋后，使用稱為切片機的精密切割工具將樣品切成薄片或切成薄片。該視頻介紹了這些常規(guī)步驟以及與之相關(guān)的一些概念。

組織固定是保存細胞和組織成分并維持其結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵步驟。細胞死亡后，天然存在的酶從細胞器中釋放出來，并開始降解整個細胞和細胞外基質(zhì)中的蛋白質(zhì)，從而破壞了細胞的結(jié)構(gòu)。固定通過直接抑制這些酶消化蛋白質(zhì)的能力和使酶切位點無法識別來防止這種降解。

固定的兩個主要機制是交聯(lián)和凝結(jié)。交聯(lián)涉及蛋白質(zhì)內(nèi)部以及蛋白質(zhì)之間的共價鍵形成，這會導(dǎo)致組織變硬并因此抵抗降解。凝結(jié)是由于使用酒精或丙酮使蛋白質(zhì)脫水而引起的，這會使蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)變形，從而使疏水或擔(dān)心水的區(qū)域移動蛋白質(zhì)表面。凝結(jié)性固定可以幫助包埋石蠟等介質(zhì)穿透組織。

zui常用的固定劑之一是福爾馬林，它是溶于水中的甲醛。在固定過程中，甲醛附著在伯胺上，例如在賴氨酸和谷氨酰胺氨基酸側(cè)鏈上發(fā)現(xiàn)的那些，形成穩(wěn)定的交聯(lián)鍵，稱為甲苯橋。此過程本質(zhì)上很慢，zui多可能需要1-2天。

固定之前，應(yīng)考慮一些注意事項。shou先，考慮樣品的擴散率。固定劑將以與固定劑的擴散系數(shù)乘以時間平方根相關(guān)的速率在組織中擴散一定距離。固定劑需要1個小時才能穿透1毫米到樣品中，將花費25個小時才能穿透5毫米。一旦福爾馬林到達組織中心，就需要發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)基石。因此，為了在合理的時間內(nèi)徹底固定樣品，樣品的厚度應(yīng)限制為4 mm。

其次，考慮固定劑的體積和pH值。固定劑與樣品的體積比應(yīng)至少為40：1，以使試劑不會隨時間流逝。盡管某些固定劑的設(shè)計目的是在酸性pH值下工作，但福爾馬林在磷酸鹽緩沖液中保持中性pH值時效果zui佳，因此不會產(chǎn)生過多的酸，從而在組織中造成假象。

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